《生物化学与分子生物学实验技术教程》以实验项目内容为主体,系统地介绍生物化学与分子生物学的基本研究技术与方法。内容分为上、中、下篇和附录四大部分。上篇包括实验入门、实验方法与技术概述、新技术简介和常用数据库简介等;中篇主要围绕各类生物大分子的分离鉴定,**突出层析、电泳、比色等实验技术,包括48个基础实验和16个综合性实验;下篇包括分子克隆、基因转化、检测等技术在内的15个基础实验和基因的差异显示、凝胶阻滞电泳及酵母双杂交系统研究蛋白质相互作用等技术的11个综合性实验;附录部分汇人了在实验中常用的各类数据资料。《生物化学与分子生物学实验技术教程》内容既可作为生命科学类本、专科生的基础生物化学和研究生的**生物化学实验教材,亦可作为分子生物学、基因工程实验课程的教材以及相关专业师生和生物科技工作者的科研参考书。

生物化学与分子生物学实验技术是生命科学领域诸多分支学科的重要研究方法与手段,也是生物专业学生必修的基础实验课程。当前,随着生物学、化学、物理、数学和计算机等学科的广泛交叉和渗透以及由此产生的研究方法和技术的不断创新,生物化学与分子生物学的理论与研究技术已经成为近代自然科学中发展*迅速的学科之一。
一本**的实验教科书,在培养学生分析和解决生命科学领域问题的能力、严谨的科学态度和独立研究能力方面,有着不可替代的作用。目前,由于学科的飞速发展,特别是以DNA重组技术为核心的分子生物学技术、2D一电泳技术等先进技术手段的建立、应用与发展,使我们深感原先的教材已经远远不能满足目前学生的要求。为顺应学科发展动态,满足实验教学指导的要求,编写组的老师将在长期的教学实践中积累的大量实验教学素材和经验汇总在一起,并在收集各方面教师、科研人员和学生宝贵意见的基础上,编写了本书。
本书内容分为上篇、中篇、下篇和附录四大部分:上篇包括生物化学与分子生物学实验入门、生物化学与分子生物学实验方法与技术概述、新技术简介和常用数据库简介;中篇主要围绕各类生物大分子的分离鉴定,安排了一系列不同层次的实验项目,并**突出了层析、电泳、比色和离心等常用的生物化学实验技术,所选实验均为教学和科研中常用而成熟的实验,包括48个基础实验和16个综合性实验;下篇包括分子克隆、基因转化、检测等技术的15个基础实验和基因的差异显示、凝胶阻滞电泳以及酵母双杂交系统研究蛋白质相互作用等技术的11个综合性实验。附录部分汇入了生物化学与分子生物学实验中常用的各类数据资料。本书既可作为生命科学类本、专科生的基础生物化学和研究生的**生物化学实验教材,亦可作为分子生物学、基因工程实验课程的教材以及相关专业师生和生物科技工作者的科研参考书。

上篇 生物化学与分子生物学实验方法与技术概论
第1章 生物化学与分子生物学实验入门
1.1实验室规则
1.2实验报告写作规范
1.3常用生物化学与分子生物学仪器的使用
1.4实验误差与提高实验准确度的方法

第2章 生物化学实验方法与技术概述
2.1生物化学实验常用的生物材料
2.2生物分子提取的一般原则
2.3生物化学分离、纯化和分析技术概述
2.4生物化学实验中常用的检测技术

第3章 分子生物学实验方法与技术概述
3.1DNA分子克隆的基本原理
3.2用于基因克隆的工具酶
3.3分子克隆的栽体与宿主系统
3.4DNA的克隆
3.5基因组文库的构建
3.6克隆基因的分离与鉴定
3.7聚合酶链式反应
3.8DNA的化学合成
3.9基因定位诱变
3.10DNA的序列测定
3.11RNA的测序

第4章 生物化学与分子生物学实验的新技术简介
4.1生物芯片技术
4.2毛细管电泳技术
4.3双向电泳技术

第5章 生物化学与分子生物学专业常用数据库简介
5.1生物化学与分子生物学专业部分因特网网址
5.2序列数据库
5.3生物信息资源导航系统和服务器
5.4国际上主要SRS数据库查询系统(序列查询系统)
中篇生物化学实验

第6章 糖类
实验1总糖和还原糖的测定-3,5-二硝基水杨酸法
实验2血糖的定量测定-Folin-Wu法
实验3肝糖原的提取和鉴定
实验4黏多糖——肝素钠效价的测定
实验5直链淀粉和支链淀粉的测定——双波长法
实验6粗纤维的测定——酸性洗涤剂法

第7章 脂质
实验7血清胆固醇的定量测定——磷硫铁法
实验8血清甘油三酯的测定
实验9植物叶片衰老过程中过氧化脂质含量的变化
实验10脂质组成对脂质单分子层通透性的影响

第8章 氨基酸和蛋白质
实验11氨基酸的纸上层析
实验12蛋白质含量测定方法Ⅰ——双缩脲法
实验13蛋白质含量测定方法Ⅱ——Folin一酚法
实验14蛋白质含量测定方法Ⅲ——紫外吸收法
实验15蛋白质含量测定方法Ⅳ——考马斯亮蓝G一250染色法
实验16鸡血清蛋白质乙酸纤维素膜电泳
实验17蛋白质的两性性质及等电点的测定
实验18蛋白质的水解和氨基酸的纸层析法分离

第9章 酶
实验19酶的基本性质实验
实验20淀粉酶活性的测定
实验21硝酸还原酶活性的测定
实验22过氧化氢酶活性的测定——碘量法
实验23脲酶K。值测定

第10章 维生素
实验24维生素A、维生素B。和维生素B2的定性测定
实验25维生素B:(核黄素)的定量测定——荧光法
实验26维生素C的定量测定——2,6一二氯酚靛酚滴定法

第ll章 核酸的性质、分离纯化与含量测定
实验27动物(脾)肝DNA的制备
实验28血液标本中DNA的提取
实验29小牛胸腺DNA的制备
实验30小牛胸腺DNA熔解温
度(Tm)的测量
实验31动物肝RNA的制备——苯酚法
实验32酵母RNA的制备Ⅰ——浓盐法
实验33酵母RNA的制备Ⅱ——稀碱法
实验34植物组织中DNA的制备
实验35核酸的含量测定Ⅰ——紫外吸收法
实验36核酸的含量测定Ⅱ——定磷法
实验37二苯胺显色法测定DNA含量
实验38地衣酚法测定RNA含量
实验39DNA碱基成分分析及含量测定

第12章 新陈代谢
实验40糖酵解中间产物的鉴定
实验41动物体肌糖原的酵解作用
实验42脂肪酸的口一氧化作用——酮体的生成及测定
实验43转氨基作用——转氨酶活性鉴定(薄层层析法)
实验44转氨基作用——血清谷丙转氨酶(SGPT)活性测定(King氏法)
实验45血清钙的测定
实验46果实中有机酸的提取与鉴定
实验47琥珀酸脱氢酶及丙二酸的**作用
实验48生物氧化与电子传递

第13章 综合性生物化学实验
实验49可溶性糖的硅胶G薄层层析
实验50离子交换柱层析分离核苷酸
实验51亲和层析法从鸡蛋清中分离溶茵酶
实验52蛋白质的盐析分级分离及凝胶层析脱盐
实验53凝胶层析法测定蛋白质的相对分子质量
实验54SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量
实验55聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点
实验56蛋白质双向电泳
实验57聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离过氧化物酶同工酶
实验58琼脂糖凝胶电泳法分离乳酸脱氢酶同工酶
实验59细胞色素c的制备及其测定
实验60尼龙固定化木瓜蛋白酶
实验6l发酵过程中无机磷的被利用和ATP的生物合成
实验62单向定量免疫电泳法——火箭电泳法
实验63酶联免疫吸附测定——ELISA
实验64蛋白质印迹——Western印迹

下篇分子生物学实验

第14章 基础分子生物学实验
实验65碱裂解法提取质粒DNA
实验66质粒DNA的限制性核酸内切酶酶切
实验67琼脂糖凝胶电泳检测DNA
实验68大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
实验69低熔点琼脂糖法回收目的基因
实验70DNA的重组
实验71重组子的筛选与鉴定
实验72聚合酶链式反应技术体外扩增DNA
实验73逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)
实验74脉冲电场凝胶电泳
实验75重组DNA序列在原核细胞中的表达
实验76外源蛋白质的诱导表达及SDS—PAGE电泳检测
实验77DNA的核苷酸序列分析
实验78DNA的分子杂交——Southern印迹
实验79RNA的分子杂交——Northern印迹

第15章 综合性分子生物学实验
实验80组织细胞中mRNA的提取与纯化
实验81利用PCR技术差异显示特异的mRNA
实验82植物基因的转化
实验83构建cDNA文库的基础实验
实验84脱氧核糖核酸酶Ⅰ足迹分析
实验85凝胶阻滞实验Ⅰ——DNA蛋白质滞后电泳分析
实验86凝胶阻滞实验Ⅱ——甲基化干扰实验
实验87凝胶阻滞实验Ⅲ——尿嘧啶干扰实验
实验88酵母双杂交系统实验Ⅰ质粒DNA转化酵母细胞
实验89酵母双杂交系统实验Ⅱ口一半乳糖苷酶活性测定
实验90酵母双杂交系统实验Ⅲ蛋白质相互作用的测定
附录
附录1纯水的制备和检验
附录2常用溶液和试剂的配制
附录3常用化学试剂的各种参数表
附录4生物细胞内的缓冲系统与缓冲液的配制
附录5细菌培养基、抗生素,
附录6部分生化物质电泳染色方法简介
附录7部分试剂与溶剂的纯化
附录8常用核酸和蛋白质的数据换算
附录9硫酸铵饱和度计算表
附录10常用蛋白质相对分子质量标准参照物
附录1120种组成蛋白质的氨基酸的生物化学性质
附录12某些生物大分子、亚细胞器及微生物的沉降系数
附录13离心机转速(r/min)与相对离心力(RCF)的换算
附录14生物化学与分子生物学中部分常见英文缩写
附录15有关的警告标志图
附录参考书目
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