第二章 醋酸纤维素薄膜电泳
纸电泳法是用滤纸作为支持介质的一种电泳法,在实验室和临床检验中都曾经广泛应用,其主要用于血清蛋白质分离,以及蛋白质、核苷酸等生化**的测定。如:在一定的pH条件下,核苷酸中含共轭双键的嘌呤或嘧啶碱基具有强紫外吸收,利用纸电泳后,在紫外光灯下显示紫色,将显色区洗脱后在特定波长下测定其吸收度,根据吸收系数可计算出某一核苷酸的含量。
纸电泳的设备简单,应用广泛,是*早使用的一种电泳技术。在早期的生物化学研究中,曾发挥重要作用。但是由于纸电泳花费时间长,支持物滤纸对蛋白质样品的吸附力较大,且滤纸本身为极性物,透明化步骤较烦琐,不利于光密度计扫描法定量测定,近年来逐渐为其他快速、简便、分辨率高的电泳技术所代替。
1957年,Kohn首先将醋酸纤维素薄膜用作电泳支持物,标志着纸电泳已被醋酸纤维素薄膜电泳所取代。醋酸纤维素薄膜电泳与纸电泳相似,只是换用了醋酸纤维素薄膜作为支持介质。
1 醋酸纤维素薄膜电泳的原理
醋酸纤维是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而形成,将其溶于丙酮等有机溶剂中,即可涂布成均一细密的微孔薄膜,厚度以0.1~0.15 mm为宜。太厚吸水性差,分离效果不好;太薄则膜片缺少应有的机械强度而易碎。不同厂家生产的薄膜主要在乙酰化、厚度、孔径、网状结构等方面有所不同,但分离效果基本一致。通常实验中用到的醋酸纤维素薄膜是由一层薄薄的聚乙烯和压附在其上的醋酸纤维素酯构成的。光滑面是聚乙烯一面,粗糙面是醋酸纤维素酯的一侧。
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