②慢慢滴加10%乙酸溶液,上层有沉淀产生,慢慢将沉淀压至烧杯底部,再继续滴加,边滴加边慢慢搅拌,用酸度计监测,使溶液pH值达到4.6~4.8,直至酪蛋白沉淀完全。
③静置冷却,倾去上层乳清液,剩余悬浮液离心15min(3000r∕min),得到粗品酪蛋白。
④用蒸馏水洗沉淀3次,每次离心10min(3000r∕min),弃上清液。
⑤用30mL无水乙醇洗沉淀1次,抽滤;再用30mL乙醇—乙醚混合液洗涤2次,分别抽滤;然后用30mL乙醚洗2次,分别抽滤。
⑥真空过滤得白色的酪蛋白,移至表面皿中,105℃烘干沉淀物至恒重,用感量为0.001g的电子天平称量所得纯品酪蛋白,计算酪蛋白的含量。
⑦计算
酪蛋白得率(%)=测得含量∕理论含量×100式中:理论含量——35g∕L牛乳。
4.讨论与分析
①分离酪蛋白加醋酸时,需边搅拌,边测pH值,同时观察沉淀。搅拌开始可稍快,接近等电点时,应缓慢搅拌酪蛋白沉淀。边滴加酸边缓慢搅拌,加入脱脂牛乳中的酸可以均匀分布,有利于酪蛋白与酸充分接触,酪蛋白沉淀比较完全,得率较高。不搅拌时酪蛋白与酸接触不充分,溶液中有酸度梯度存在,上层与酸接触沉淀形成结块,下层未与酸接触酪蛋白不能完全沉淀而影响得率。搅拌过于剧烈时会使形成的酪蛋白凝块破碎不易分离,得率下降。
②随着温度的升高酪蛋白得率也随之增加,而温度过高其得率也会有所下降,主要是由于酪蛋白在牛乳中以酪蛋白磷酸钙的形式存在,随着温度的升高,酪蛋白胶囊之间热碰撞频率增加,酪蛋白容易相互结合成块,但温度超过55℃后,蛋白质的次级结构遭破坏,静电斥力增加,使酪蛋白结合变得困难而不易结块,导致酪蛋白得率下降。
③纯净的酪蛋白为白色,若发黄表明脂肪未洗净。用乙醇和乙醚清洗酪蛋白沉淀时,应搅拌、浸泡,充分洗净脂肪。若洗涤不净,可进一步用石油醚,将烘干酪蛋白中的脂类除去,大大提高酪蛋白的纯度。
……