实验一 细菌DNA G+C摩尔百分含量的测定
一、实验目的
学习采用热变性法测定细菌DNA G+C摩尔百分含量的技术。
二、实验原理
细菌DNA G+C摩尔百分含量是细菌分类中一个能反映属、种间亲缘关系的遗传型特征。在《伯杰氏细菌鉴定手册》第8版中,DNA G+C摩尔百分含量测定已成为细菌属、种的常规鉴定方法。
每种生物都有特定的DNA G+C摩尔百分含量。动植物的DNA G+C摩尔百分含量变化范围较小,主要集中在30%~50%,而细菌的DNA G+C摩尔百分含量变化较大,在25%~75%,说明不同的细菌类群,其G+C摩尔百分含量不同,因此,DNA G+C摩尔百分含量在细菌鉴定方面更有价值。一般认为同种内不同菌株的DNA G+C摩尔百分含量的差异不大于5%,而同属不同种的差异不大于10%。如果两个菌株的DNA G+C摩尔百分含量差别大于10%,那就表明它们的基因组(genomes)碱基序列显著不同,它们的亲缘关系较远;相反,如果两个菌株的DNA G+c摩尔百分含量相似(如≤5%),则分两种情况:如序列顺序也相似,则可能属于同一个种;如序列顺序不同,则不属于同一个种。所以,测定DNAG+C摩尔百分含量的重要意义在于否定的作用。在细菌鉴定和分类中,必须将DNA G+C摩尔百分含量与DNA同源性、表型特征等性状相结合来进行分析。
DNA碱基组成的测定方法有直接法和间接法两种。直接法(又称化学法)包括纸色谱法、**液相色谱法等,它们可直接测定DNA。水解后各种碱基的含量。间接法(又称物理法)是利用DNA的各种物理、化学性质与碱基组成的相关性来测定其碱基组成,常用的方法有浮力密度法和热变性法。
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