《基因工程实验教程》是以基因工程实验为主要内容,编写的一本实验教材。全书共包括21个基因工程方面的基本实验,同时也涵盖了与基因工程密切相关的部分细胞培养技术、生物信息学计算机操作技术等内容,书后还附有基因工程常用试剂配制、实验室常用数据和实验室**的一般常识。书中大部分实验是我们在教学中通过反复摸索后才搬进学生课堂的,也有一部分实验借鉴了已发表的科研论文和互联网的资料以及编写人员自己的相关科研成果。所编写的每个实验都配有基础知识链接和背景资料的介绍,对每个实验的原理和操作步骤以及所出现问题的分析,力求解释详尽,以便于读者能较快地掌握实验原理和操作技巧。
本书充分展示了编写人员在编写过程中各自的教学和科研优势,使本教程能够*大限度满足生物技术专业的本科教学需求。

**部分 基因工程实验
**章 组织细胞遗传物质的提取
实验一 动物胸腺或脾脏有核细胞基因组DNA 提取
一、相关知识链接
生物的基因组(genome)是指一套染色体中的完整DNA 序列。二倍体生物由两套染色体组成,其中一套染色体的DNA 序列就是一个基因组。基因组一词可以特指核基因组,亦可用来表示细胞质基因组,如粒线体基因组或叶绿体基因组等。
胸腺和脾脏是哺乳动物重要的免疫器官,胸腺主要是T 细胞分化和成熟的场所,具有免疫调节和自身免疫耐受的建立和维持等功能。脾脏是T 和B 淋巴细胞的定居场所,同时也是免疫应答的发生场所,在胚胎期还有造血功能。T 和B 淋巴细胞均具有全套的基因组DNA,通过胸腺或脾脏有核细胞基因组DNA 的提取,可以为研究相关哺乳动物的遗传物质提供物质基础。
二、实验原理
应用十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)在较高温度(55 ~ 65℃)条件下裂解细胞,同时联合使用蛋白酶K,使组织或细胞中蛋白质(尤其是核酸酶)充分降解,使染色体离析,蛋白变性,并释放出核酸,然后采用盐溶的方法,加入高浓度的饱和NaCl 溶液,*后采用等体积的异丙醇沉淀DNA,以达到释放和萃取高质量核酸的目的。
三、实验目的
掌握从动物组织中提取DNA 的操作方法,制备高质量的基因组DNA,作为PCR 扩增的模板或基因组分析。
四、实验材料和配方
(一) 实验器材与设备
恒温水浴锅,高速台式离心机,漩涡振荡器,高压**锅,电子天平,低温冰箱,手术剪,微量移液器(1000μl、100μl),加样枪头(1000μl、100μl),1.5ml 离心管。
(二) 试剂与配方
1.DNA 提取液 10mmol/ L Tris-HCl(pH8.0),2mmol/ L EDTA(pH8.0),0.4mmol/ L NaCl,1% SDS。
2.其他试剂 蛋白酶K(20mg/ ml),异丙醇,70% 乙醇溶液,无水乙醇,6mol/ L NaCl,溴化乙锭(EB)染色液。
五、实验方法和步骤
1.将用于抽提DNA 的动物组织(胸腺或脾脏组织)约50mg 放入1.5ml 离心管中,用手术剪剪碎成匀浆。
2.加入500μl

**部分 基因工程实验
**章 组织细胞遗传物质的提取
实验一 动物胸腺或脾脏有核细胞基因组DNA提取
实验二 哺乳动物组织mRNA提取
实验三 植物组织的基因组DNA提取
实验四 植物细胞RNA提取
实验五 细菌基因组DNA的制备
实验六 大肠杆菌质粒DNA的小量提取
第二章 核酸凝胶电泳分离与纯化方法
实验七 核酸的琼脂糖凝胶电泳
实验八 DNA片段的回收与纯化
实验九 紫外分光光度法测定核酸含量
实验十 PCR反应及其产物检测
第三章 DNA的重组连接和克隆的筛选鉴定
实验十一 限制性内切酶切割DNA
实验十二 DNA的重组和连接
实验十三 大肠杆菌感受态细胞的制备和重组DNA分子的转化
实验十四 重组转化子DNA的鉴定(蓝白斑筛选法)
实验十五 转化克隆的筛选和鉴定
实验十六 工程菌的诱导和酶活性检测
实验十七 SDS-PAGE电泳
第四章 综合大实验
实验十八 基因工程综合大实验
实验十九 植物基因转化与转基因植株鉴定
第五章 基因工程相关的其他实验方法
实验二十 限制性片段长度多态性(RFLP)分析
实验二十一 免疫印迹法(Western blot)检测蛋白表达
第二部分 细胞培养技术
第六章 细胞培养的一般操作过程
实验二十二 实验器械、器皿的清洗、包装和消毒
实验二十三 应用微孔滤膜过滤**
实验二十四 细胞培养用液的配制
实验二十五 小鼠肾脏细胞原代培养
实验二十六 动物细胞的传代培养
实验二十七 烟草叶片愈伤组织诱导和器官发生
实验二十八 培养细胞的冻存与复苏
实验二十九 细胞计数
实验三十 细胞活力的测定方法
实验三十一 动物细胞融合
实验三十二 MTT法检测细胞相对数和相对活力
实验三十三 细胞的基因转染实验——脂质体法
第三部分 生物信息学
第七章 生物信息学实验
实验三十四 生物信息学数据库
实验三十五 核酸序列检索
实验三十六 原核与真核生物核酸序列分析
实验三十七 核酸序列分析和引物设计
实验三十八 蛋白质序列分析
第四部分 附录
第八章 基因工程常用试剂配制及常用数据
附录一 基因工程常用试剂配制
附录二 PCR引物设计时常用Ⅱ型限制性内切酶的酶切位点保护碱基
附录三 常用的基因工程型宿主菌的相关信息
附录四 基因工程常用数据
附录五 常用化学试剂的一般常识
附录六 分子生物学综合数据库工具箱