《21世纪生物技术系列:组织细胞化学理论与技术(第3版)》在第二版基础上,进一步压缩理论,使其更精练,增加流程图表,使之更容易理解。在技术章节做探索性改革创新:①技术原理增加流程图示;②技术操作步骤主要用流程图展示,使之更一目了然;③详化实验操作经验和注意事项,提高和保证实验可靠性;④增加细胞和组织免疫荧光多重标记技术。 组织细胞化学理论与技术-第3版_王廷华,李力燕,(新加坡)基 主编_科学出版社_

第三节 显示细胞和组织成分、结构的方法
一、光学显微镜技术
(一)一般光学显微镜技术
一般光学显微镜技术又称普通光镜技术,石蜡切片术是*经典、*常用的技术,其基本程序为取材、固定、脱水、包理、切片、染色、封片。石蜡切片*常用的染色法是苏木精一伊红染色法。简称H—E染色法。苏木精为碱性染液,主要使细胞核中的染色质与胞质中的核糖体染成紫蓝色;伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。组织结构易与碱性染料亲和的染色特性称为嗜碱性;易与酸性染料亲和的染色特性称为嗜酸性;若与两种染料的亲和力都不强,则称中性。若用某种染料染色,染出来的颜色与染料本身的颜色不一致.则称为异染性。
除石蜡切片外,在制作较大组织块(如眼球、脑)的切片时,常用火棉胶包埋.对要进行组织化学或免疫组织化学反应的标本,常用冰冻切片,以保存蛋白质(包括酶)的结构和活性.此外.尚有将血液直接涂于玻片上的涂片法;将疏松结缔组织或肠系膜等撕成薄片铺在载玻片上的��片法:将骨和牙等硬组织磨为薄片的磨片法。
为特异性地显示某种细胞、细胞外基质成分或细胞内的某种结构,常需采用特殊染色。如对神经组织与网状纤维的显示等常用硝酸银染色(银染);对多糖类物质常用高碘酸一Schiff夫反应染色等;对脂类物质常用苏丹类染料或四氧化锇进行脂肪染色;对弹性纤维常用醛品红等染色(弹性染色)。另外,可利用某些细胞的生物活性进行染色,如利用巨噬细胞有很强的吞噬能力而进行的活体染色。
(二)特殊光学显微镜技术
从研究对象的特性与研究目的出发.应用带特殊装置显微镜的技术,统称为特殊光学显微镜技术。
1.荧光显微镜用于观察在组织化学与免疫组织化学中使用荧光素染色或作为标记物的标本以及某些有白发荧光的标本,使研究者通过观察荧光的分布与强弱来了解组织的情况.荧光显微镜用得*多的是在免疫组织化学中,首先用荧光素标记抗体,再利用抗原与抗体结合的性质,检测抗原的存在与分布。
2.相差显微镜用于观察组织培养中活细胞的形态结构,可将活细胞不同厚度及细胞内各种结构对光产生的不同折射转换为光密度差异(明暗差),从而使镜下结构反差明显,影像清晰。
3.暗视野显微镜用于观察微小颗粒的运动,如细胞胞质内的线粒体以及液体介质中的细菌、酵母、真菌等的运动。暗视野显微镜极大地提高了分辨率,普通光镜的*大分辨率为0.2um,暗视野显微镜可达0.004um.
4.激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)CLSM是一种高光敏度与高分辨率的仪器,可对细胞的多种结构在亚细胞水平进行**快速的定位与定性测定。配以微机图像处理系统,即可对细晌汫行三维结构的图像分析。
……

上篇 组织细胞化学理论
**章 免疫组织细胞化学基础
**节 细胞
第二节 组织概述
第三节 显示细胞和组织成分、结构的方法
第二章 组织细胞化学的免疫学与酶学基础
**节 抗体的发现及其特性
第二节 免疫球蛋白分子
第三节 组织细胞化学的酶学基础
第三章 免疫组织化学基本理论
**节 免疫组织化学的基本原理、发展及展望
第二节 免疫组织化学技术的分类
第三节 免疫组织化学技术常用仪器设备、器皿准备及试剂配制
第四节 免疫组织化学标本的获取及处理
第五节 免疫组织化学染色后的观测
第六节 常用免疫组织化学技术的注意事项
第四章 酶组织化学
**节 福尔根显示DNA的方法
第二节 高碘酸.schiff反应显示糖原和其他多糖
第三节 异丙醇油红O法
第四节 碱性磷酸酶显示法
第五节 碱性磷酸酶与PAS反应合并染色法
第六节 酸性磷酸酶显示法
第七节 三磷酸腺苷酶显示法
第八节 葡萄糖-6-磷酸酶铅法显示
第九节 偶氮偶联法显示非特异性酯酶
第十节 乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶显示法
第十一节 同时偶联法显示氨基肽酶
第十二节 细胞色素氧化酶显示法
第十三节 琥珀酸脱氢酶显示法(四唑盐法)
第十四节 乳酸脱氢酶显示法
第十五节 3β-羟甾体脱氢酶显示法
第五章 原位杂交组织化学
**节 探针制备
第二节 原位杂交的组织标本制作
第三节 杂交组织化学反应
第四节 实验对照
第五节 生物素标记探针杂交方法
第六章 神经形态示踪方法学
**节 辣根过氧化物酶示踪技术
第二节 荧光染料追踪技术
第三节 放射自显影神经示踪
第四节 顺行示踪技术
第七章 形态定量技术及其应用
**节 概述
第二节 目前形态定量研究方法简介
第三节 体视学概述
第四节 体视学技术的基本方法
第五节 体视学技术中各参数的计算
第六节 图像分析仪在医学实验研究中的应用
第八章 细胞凋亡
**节 概述
第二节 与细胞凋亡相关的酶类
第三节 细胞凋亡的信号转导途径
第四节 细胞凋亡的调控
第五节 细胞凋亡与疾病
第六节 细胞凋亡的研究方法
下篇 组织细胞化学技术
第九章 组织化学技术的应用
**节 免疫组织化学ABC法检测猫背根节 c-jun、c-fos的表达
第二节 免疫组织化学SP法在检测成年猴脑BDNF、NT-4和NGF中的应用
第十章 用酶组化技术显示猫脊髓Ⅱ板层一氧化氮合酶的表达
第十一章 原位杂交组织化学技术检测猫背根节 BDNF和NT-3的mRNA表达
**节 材料和方法
第二节 结果
第三节 结果分析与经验体会
第十二章 组织化学双标技术
**节 脊髓Ⅱ板层NOS、BDNF样神经膨体的免疫组化与酶组化双标技术
第二节 免疫组织化学和原位杂交双标技术检测猫背根节 BDNF、NT-3及其mRNA的表达
第十三章 组织化学技术的关键与要点
**节 高压控制免疫组化非特异性反应
第二节 组织化学标本处理要点
第三节 组织化学实验步骤操作中的注意事项
第四节 组织化学结果显色要点
第五节 经验体会
第十四章 石蜡切片免疫组织化学实验的技术关键要点
**节 石蜡切片制备
第二节 免疫组织化学染色
第三节 免疫组织化学染色的对照设置
第四节 免疫组织化学染色过程中出现问题的原因与对策
第十五章 原位细胞凋亡TUNEL法检测大鼠全横断损伤脊髓细胞凋亡
第十六章 大鼠皮质脊髓束BDA追踪实验
**节 实验原理
第二节 实验所需设备、试剂及其配制
第三节 实验步骤
第四节 实验结果
第五节 结果分析与实验体会
第十七章 大鼠背根节 细胞**终末脊髓内CB-HRP示踪技术
**节 实验原理
第二节 实验仪器、试剂及其配制
第三节 实验方法
第四节 实验结果
第五节 结果分析
第六节 经验体会及注意事项
第十八章 免疫荧光技术
**节 概述
第二节 免疫荧光技术的原理及常用方法
第三节 常用抗体标记荧光染料的选择
第四节 免疫荧光技术注意事项
第五节 免疫荧光技术的应用
第十九章 免疫荧光单标技术检测正常SD大鼠脊髓GFAP表达
**节 实验原理
第二节 实验所需设备、试剂及其配制
第三节 实验方法
第四节 实验结果
第五节 结果分析
第六节 经验体会及注意事项
第二十章 大鼠脊髓白质GFAP阳性星形胶质细胞和GDNF免疫荧光双标技术
**节 实验原理
第二节 实验所需设备、试剂及其配制
第三节 实验方法
第四节 实验结果
第五节 结果分析
第六节 经验体会及注意事项
附录
附录一 组织化学的常用试剂及处理
附录二 原位杂交组织化学常用试剂及处理
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