《PCR理论与技术(第3版)》是《PCR理论与技术(第3版)》的一个分册,分上、下篇,共13章。上篇主要介绍PCR基础理论和技术操作知识,以及技术操作中可能遇到的各种问题的解决方法。下篇介绍PCR相关技术的应用,包括PCR技术在构建cDNA文库、测序及基因突变检测,性别鉴定,动植物、微生物DNA分型研究中的应用;PCR技术分析DNA序列多态性、VNTR和STR;PCR技术检测CDK4敲入转基因鼠的基因型;PCR体系中模板DNA浓度与PCR扩增效率的关系。
《PCR理论与技术(第3版)》可供生物医学专业研究生、本科生及从事分子生物学研究的科研人员阅读和实验时参考。

上篇 PCR的基本理论与技术
**章 常规PCR 技术的原理与方法
常规聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是20 世纪80 年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。PCR 是在体外模仿体内的DNA 复制条件进行DNA 大量快速复制的过程,具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;可以从一根毛发、一滴血,甚至一个细胞中于数小时内将所要研究的目的基因或某一DNA 片段扩增至十万乃至百万倍,获得足量的DNA 供分析研究和检测鉴定。其基本过程是以特定的靶DNA 片段为模板,以基因片段特异性的引物为延伸起点,在耐热DNA 聚合酶催化下,通过反复的高温变性、低温退火、中温引物延伸等步骤,快速特异地体外复制出目的DNA 片段。其特点是每次新合成的DNA 片段都和其母链一样可以作为下一次热循环过程中DNA 复制的模板,因此可以实现对特定核苷酸片段的指数级扩增。
**节 PCR 技术的发展简���
一、PCR 技术的提出与发明
对遗传物质核酸的研究如今已有100 多年的历史,核酸被证实为生物的遗传物质及DNA 双螺旋结构的发现奠定了现代分子生物学的基础。随着对DNA 物理与化学性质的深入研究,人们了解了DNA 变性与复性的性质,以及DNA 在体内进行半保留复制的原理和过程(图1-1)。到了20 世纪60 年代末70 年代初,科学家们开始致力于研究体外分离遗传基因。Korana 也于1971 年*早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA 变性、与适当的引物杂交,再用DNA 聚合酶延伸引物获得特定DNA片段的复制;不断重复该过程便可获得大量的tRNA 基因拷贝。”
1983 年由美国加州Kary B.Mullis 博士等利用当时已经发现并分离获得的DNA 聚合酶大肠杆菌DNA 聚合酶Ⅰ的Klenow 片段,首先建立了体外DNA 扩增法。其方法为用寡核苷酸引物扩增位于两个已知序列之间的DNA 片段。首先合成了两条引物,其序列分别与待扩增的模板基因的序列互补,可以分别结合在模板DNA 对应的两条单链的目的基因的两端,并随着引物从5′→3′延伸合成新的DNA。在过量的两种引物和四种脱氧核糖核苷三磷酸dTTP、dATP、dCTP、dGTP 存在的情况下,模板DNA 通过加热而变性,然后冷却到一定

上篇 PCR的基本理论与技术
**章 常规PCR技术的原理与方法
**节 PCR技术的发展简史
第二节 PCR技术的基本原理
第三节 PCR反应体系与反应条件
第四节 PCR反应体系和反应条件的优化
第五节 PCR反应的保真性
第六节 PCR常见问题及对策
第二章 PCR模板制备
**节 基因组DNA提取技术
第二节 RNA提取技术与cDNA模板的制备
第三章 PCR扩增产物处理与PCR实验室
**节 PCR扩增产物分析与处理
第二节 PCR产物的纯化
第三节 PCR污染与对策
第四节 PCR技术实验室
第四章 定量PCR技术
**节 定量PCR的基本概念与基本原理
第二节 实时荧光定量PCR
第五章 原位PCR相关技术
**节 原位PCR
第二节 原位PCR的分类
第三节 原位PCR技术流程
第六章 其他PCR相关技术进展
**节 反向PCR技术
第二节 巢式PCR
第三节 多重PCR
第四节 串联重复序列的PCR扩增
第五节 RAPD技术
下篇 PCR相关技术的应用
第七章 PCR技术在构建cDNA文库、测序及基因突变检测中的应用
**节 PCR在cDNA文库构建中的应用
第二节 PCR在DNA测序中的应用
第三节 PCR技术在基因突变检测中的应用
第八章 PCR技术分析DNA序列多态性
**节 DNA的两种多态性和遗传标记分类
第二节 PCR技术分析DNA序列多态性
第九章 PCR技术分析VNTR和STR
**节 概述
第二节 扩增片段长度多态性分析分型技术基本原理
第三节 用PCR技术分析小卫星VNTR基因座分型的基本技术
第四节 用PCR技术分析微卫星(STR)基因座
第十章 PCR技术在性别鉴定中的应用
**节 概述
第二节 PCR扩增的基本方法
第三节 讨论
第十一章 PCR技术在动植物、微生物DNA分型研究中的应用
**节 概述
第二节 实验方法与步骤
第三节 结果与讨论
第十二章 PCR技术检测CDK4敲入转基因鼠的基因型
**节 实验原理
第二节 实验方法
第三节 实验结果
第四节 结果分析及注意事项
第十三章 PCR体系中模板DNA浓度与PCR扩增效率的关系
**节 实验目的
第二节 实验方法
第三节 实验结果
第四节 结果分析