《生化实验方法和技术》在**版基础上进行修订,增加“基因工程和蛋白质工程技术”一章,附录增加了“分子生物学及基因工程常用资料”和“新型层析介质及其性质”。全书共九章82个实验和附录。《生化实验方法和技术》在注意加强基本实验方法和技能训练的同时,引进了一些新近发展起来的、重要的生物化学及分子生物学研究方法和技术。
《生化实验方法和技术》可供生化专业大学生和有关专业研究生作实验课教材,也可供有关教师和科研人员参考。

《生化实验方法和技术》自1981年(**版)出版以来,深受高等院校生物学系的大学生、研究生以及其他生物学工作者的欢迎。本书经过9次印刷,仍不敷应用。读者们通过本书的使用,也来信对本书提出了许多宝贵意见和建议。这些情况使编者深受鼓舞,成为改写再版的动力。
另一方面,20世纪70年代以来,生物化学和分子生物学发生了深刻的变化。尤其重组DNA技术使我们有可能从分子水平上认识基因组的组成和它的表达机理。。DNA的分子克隆和序列测定丰富了我们对于基因和蛋白质的认识。用基因工程的定点突变方法可以产生全新的蛋白质。利用在细菌中进行基因的克隆和表达可以大量产生医用的蛋白质,如胰岛素、干扰素等。杂交瘤方法产生专一性的单克隆抗体为生物学和医学研究开辟了新的途径。这些进展要求生物化学的实验教材作出相应的改变,也是这种认识促使编者决心再版。
再版的编写原则仍然是从加强基础的观点出发,侧重于给学生以生物化学和分子生物学中基本的实验方法和技能训练,同时也注意增加一些新近发展起来的、重要的生物化学研究方法和技术,作为大学生、研究生进入生物化学和分子生物学研究领域的准备。
本书**版共八章61个实验。在改编过程中,删除了**版中8个实验,改编重写了9个实验,保留了44个实验。再版新增“基因工程和蛋白质工程技术”一章,新增实验29个,共九章82个实验。新增和改编重写的实验,和以往一样,都经过学生做过,或者是教师、研究生在研究工作中经常应用的实验技术。这些实验可以说是比较成熟和经过反复验证的。再版附录部分增加了“分子生物学及基因工程常用资料”和“新型层析介质及其性质”两部分。
参加再版新增实验编写工作的有:张庭芳、李令媛、胡美浩、徐长法、朱圣赓、黄仪秀、郭振泉、王重庆、王素云、周先碗、郝福英、李云兰、肖能虑、茹炳根、倪逸声等。再版*后的统一编审工作由张龙翔、张庭芳、李令媛共同完成。
较长时期参加生物化学实验教学的李德昌和其他教师以及教学辅助人员对选定实验提出过很好的意见。再版编写大纲曾在1993年10月由**教委生物学教学指导委员会生化组在黄��召开的生物化学专业实验研讨会上讨论。参加会议的有南京大学、武汉大学、复旦大学、中山大学、吉林大学、山。东大学、华东师范大学、安徽大学、北京大学、高等教育出版社等单位的代表。他们提出了很多宝贵意见。高等教育出版社谭丽霞责任编辑为再版的出版做了大量工作。编者在此一并致谢。

序
**章 糖
实验一 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法
实验二 细菌细胞壁糖的薄层层析
实验三 葡糖-1-磷酸的制备及其纯度测定

第二章 脂类
实验四 红细胞膜的制备及其结构成分的分析
实验五 脂质体的制备
实验六 包裹**脂质体的制备
实验七 靶向脂质体的制备
实验八 猪心肌线粒体、亚线粒体的制备及可溶性腺苷三磷酸酶的提纯
实验九 猪心线粒体腺苷三磷酸酶复合体在脂质体上的重组

第三章 蛋白质
实验十 苯甲酰L-酪氨酰胺的合成
实验十一 N-乙酰-L-酪氨酸乙酯的合成
实验十二 双甘二肽的合成
实验十三 胱氨酸的制备
实验十四 总氮量的测定——微量凯氏定氮法
实验十五 蛋白质及肽的N末端氨基酸FDNB分析法
实验十六 蛋白质及肽的N末端氨基酸DNS分析法——聚酰胺薄膜层析技术
实验十七 羧肽酶法测定蛋白质及肽的C末端氨基酸
实验十八 蛋白质及肽的序列分析——PTH分析法
实验十九 DABITC/PITC双偶合法测定蛋白质序列
实验二十 邻苯二甲醛荧光分析法及其在肽检测中的应用
实验二十一 血清蛋白质的纸上电泳
实验二十二 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离蛋白质
实验二十三 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量(M1)
实验二十四 聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量(M1)
实验二十五 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点
实验二十六 蛋白质相对分子质量(M1)的测定——凝胶层析法
实验二十七 细胞色素c的制备及测定
实验二十八 鸡卵类粘蛋白的制备
实验二十九 牛脑钙调素的分离纯化及活性测定
[附]蛋白质含量的测定法
[附1]双缩脲法
[附2]Folin-酚试剂法(Lowry法)
[附3]考马斯亮蓝染色法(Bradford法)
[附4]紫外吸收法

第四章 酶
实验三十 胰蛋白酶的动力学研究
实验三十一 脲酶的动力学研究
[附]康维微量等温蒸馏定氨法
实验三十二 酰化酶I的制备及活力测定
[附]氨基酸含量的测定法
[附1]茚三酮溶液显色法
[附2]甲醛滴定法
实验三十三 猪胰蛋白酶的结晶及活力测定
实验三十四 亲和层析法纯化胰蛋白酶
实验三十五 乳酸脱氢酶同工酶的制备及活力测及活力测定
实验三十六 辣根过氧化物酶的制备及活力测定
实验三十七 大肠杆菌碱性磷酸酯酶的制备
实验三十八 羧肽酶Y的分离提纯
实验三十九 亲和层析法分离牛脾二肽酶
实验四十 亲和层析法纯化胃蛋白酶
实验四十一 限制性内切酶EcoRI的纯化及活力测定
实验四十二 铜锌超氧化物歧化酶的分离、纯化及其纯度鉴定
实验四十三 利用苯甲脒一琼脂糖凝胶亲和层析法纯化尿激酶

第五章 核酸
实验四十四 动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定
[附1]紫外吸收法测定核酸含量
[附2]二苯胺显色法测定DNA含量
[附3]地衣酚显色法测定RNA含量
[附4]定磷法测定核酸含量
实验四十五 酵母和白地霉RNA的制备(稀碱法和浓盐法)
实验四十六 酵母转移RNA的制备(苯酚法)
实验四十七 用硫氰酸胍一酚一氯仿分离提取RNA及mRNA的纯化
实验四十八 小牛胸腺DNA的制备(浓盐法)
实验四十九 细胞核的分离
实验五十 大鼠肝细胞染色质的分离
实验五十一 RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验五十二 DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验五十三 脉冲电场凝胶电泳分离大分子DNA
实验五十四 离子交换柱层析法分离核苷酸
实验五十五 高压纸上电泳法分析鉴定核苷酸
实验五十六 DNA重复序列与单一序列的分离——DNA的羟基磷灰石柱层析与DNA复性动力学方法
实验五十七 肌二磷和胞二磷的化学合成

第六章 基因工程和蛋白质工程技术
实验五十八 质粒的分离、纯化和鉴定
[附1]质粒DNA的小量制备
一、碱裂解法
二、煮沸法
三、小量一步提取法
[附2]质粒DNA的大量提取
一、碱裂解法
二、SDS裂解法
三、煮沸法
[附3]质粒DNA的纯化
一、氯化铯一溴乙锭梯度平衡超速离心法
二、柱层析法
实验五十九 DNA探针的同位素标记法
一、双链DNA探针的标记
(一)切口移位法
[附]DE81滤纸吸附法测定
放射性标记的参入比
(二)随机引物延伸法
二、DNA末端标记法
(一)T4噬菌体多核苷酸激酶标记DNA5端
(二)T4DNA聚合酶标记双链DNA3末端
实验六十 用光敏生物素标记核酸探针检测基因
实验六十一 M13噬菌体载体DNA的重组和克隆
实验六十二 核酸分子杂交及Southern印迹术
实验六十三 聚合酶链式反应(PCR)技术
实验六十四 cDNA的合成及克隆——逆转录与PCR偶联法
实验六十五 λgtll噬菌体表达文库的筛选
一、寡聚核苷酸探针筛选法
二、免疫学筛选法
实验六十六 DNA序列分析——化学法
实验六十七 DNA序列分析——酶法
一、单链DNA模板法
二、双链DNA模板法
实验六十八 寡聚核苷酸引物诱导的定点突变

第七章 免疫化学
实验六十九 动物的常规免疫和抗血清IgG类的纯化
实验七十 双向免疫扩散法及免疫电泳
一、双向免疫扩散测定法
二、微量免疫电泳法
三、对流免疫电泳
四、单向定量免疫电泳(火箭电泳)
五、双向定量免疫电泳
实验七十一 酶联免疫吸附测定法
实验七十二 免疫吸附亲和层析法分离纯化甲胎蛋白
实验七十三 用免疫荧光法观察甲胎蛋白在人胚肝中的分布
实验七十四 单克隆抗体技术
一、融合用细胞的制备
二、细胞融合
三、杂交瘤细胞的选择培养
四、特异性抗体的检测
五、杂交瘤细胞的克隆化
六、杂交瘤细胞的冻存
七、杂交瘤细胞株染色体检测
八、单克隆抗体的大量制备
九、单克隆抗体的纯化
十、单克隆抗体的保存
十一、单克隆抗体Ig类型的鉴定
实验七十五 固相免疫法检测抗原纯度和相对分子质量及Western印迹术

第八章 组织代谢
实验七十六 瓦氏呼吸计测压法及组织呼吸强度的测定
一、瓦氏呼吸计测压法
二、组织耗氧量的测定
实验七十七 D-系α-氨基酸的氧化脱氨基作用
[附]等温蒸馏定氨法
实验七十八 用液氮固定法研究动物的新陈代谢——自然缺氧条件下
机体乳酸含量变化的测定
实验七十九 用滤纸定量层析法研究大
白鼠在自然缺氧状态下
脑组织中游离氨基酸
含量的变化

第九章 放射性同位素
实验八十 放射性焦磷酸盐(PPi)的制备
实验八十一 酶促合成高比放射性7磷一腺苷三磷酸
实验八十二 放射性焦磷酸(3zPPi)一腺苷三磷酸交换法测定核糖核酸连接酶活性

附录
一、实验室**及防护知识
二、实验室常识
三、玻璃仪器的洗涤及各种洗液的配制法
四、缓冲溶液
五、生物化学中某些重要化合物的Mr及pK值
六、某些重要生化物质的摩尔消光系数
七、氨基酸的一些物理常数一
八、某些蛋白质的物理性质
九、核苷、核苷酸及其衍生物的一些物理常数
十、某些生物大分子、亚细胞器及微生物的沉降系数
十一、指示剂
十二、冷却剂和干燥剂
十三、硫酸铵饱和度的常用表
十四、测压法常用物理常数表
十五、同位素资料
十六、离心机转数(r/min)与相对离心力(RCF)的换算
十七、试剂的配制及一些常用数据表
十八、层析法常用数据表及性质
(一)离子交换纤维素
(二)常用离子交换树脂某些物理化学性质表
(三)各类常用离子交换树脂型号对照表
(四)聚丙烯酰胺凝胶的技术数据
(五)琼脂糖凝胶的技术数据
(六)各种凝胶所允许的*大操作压
(七)如何选择层析介质
(八)凝胶过滤层析介质分离范围总览
(九)凝胶过滤层析介质的技术数据
(十)离子交换介质在纯化步骤中的选择
(十一)离子交换层析介质的技术数据
(十二)疏水层析介质的技术数据
(十三)亲和层析介质的技术数据w
(十四)反相层析介质的技术数据
(十五)在位清洗和在位消毒
十九、分子生物学及基因工程常用数据
(一)有关核酸的常用数据
(二)常见限制性内切酶酶切位点
(三)酶类
(四)缓冲液
(五)贮存液
(六)与DNA凝胶电泳有关的数据
(七)细菌培养基和抗生素
(八)杂交试验中用于降低背景的封闭剂
(九)溴化乙锭溶液的净化处理
二十、一些常用单位
二十一、一些重要的生物化学期刊及手册
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